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鱟試劑-廈門鱟試劑生物科技股份有限公司官網

鱟試劑檢測細菌內毒素的體會

發布時間:2011-04-08
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作者:王西成來源:INTERNET


  細菌內毒素是微生物的一種代謝產物,能引起恒溫動物和人體體溫異常升高,其中革蘭陰性桿菌所產生的內毒素致熱活性最強,很少劑量即能引起廣泛的生物效應及病理作用,嚴重時甚至危及生命。因此,加強其檢測便成為輸液制劑、市售輸液藥品、一次性注射器等面臨的重要課題,現將體會介紹如下。

  1 檢測方法

  一般最常用的是家兔發熱試驗法(RT)與鱟試驗法(LT)。RT為一種定性檢測內毒素的方法,應用歷史悠久,有很多限制,如家兔對內毒素反應上有個體差異,敏感度不高、耗時、不能定量檢測等。LT具有快速、簡便、敏感度高、假陽性少、試劑耗費少等優良,可廣泛應用于注射劑的熱原控制,組液法對非內毒素引起的熱原則不敏感。

  2 影響因素

  2.1 試劑靈敏度由于鱟試劑靈敏度以能與之產生陽性反應的內毒素的最低限度表示,靈敏度變化將使測定結果所反應的樣品中內毒素允許限度發生變化,所以應進行靈敏度標化,特別是更換鱟試劑批號時,因為在LT操作過程中,各個實驗室條件之間必定有差異,標化時,應使用同一批號鱟試劑稀釋液,不宜用滅菌水取代。鱟試劑存放一定時間后(如半年),靈敏度有可能發生變化,也應進行標化。文獻中曾有報道,因鱟試劑靈敏度實測值與標化值差異過大而引起同批檢測樣品截然相反的實驗結果。鱟試劑超過有效期,須進行靈敏度考核,對于0.5ml/支,如陽性管成立,證明其活性仍可使用,對于0.1ml/支即使陽性管能成立,也不能使用,因為它是在不同安瓿中作對照。

  2.2 干擾試驗是杜絕出現假陰性結果的有效且可行的措施。所有法定的藥物或樣品檢測均需在未稀釋或適當稀釋后測定,稀釋倍數不能超過最大有效稀釋后測定,稀釋倍數不能超過最大有效稀釋倍數,否則其中的內毒素經稀釋后濃度過低而不被鱟試驗法檢測出。若供試品有干擾現象(抑制或增強),經處理,仍未達到試驗要求的條件,則應服從家兔法,此時家兔法仍是檢測其中內毒素限量的適宜方法。另外,為提高鱟試驗法的準確性我們認為有無干擾物質存在,均應同時做干擾試驗,以排除環境、操作、試劑、藥物等方面可能存在干擾鱟凝膠形成的因素,避免出現假結果,確保實驗可靠性。

  2.3 反應靈敏度酸堿度是影響鱟試驗法反應靈敏度的一個重要因素,筆者根據多年的工作經驗,認為在進行鱟試驗法前,預先測定一下pH值,然后調至5.0~6.0為宜,另外,溫度在整個實驗過程中也應恒定,否則檢測的靈敏度將顯著下降,甚至反應被抑制,文獻中曾有多次報道。

  2.4 操作加樣結束,應即放入恒溫水浴鍋中,因液態鱟試劑極不穩定,室溫放置時間過長會影響反應靈敏度,同時,供試品在恒溫水浴中應避免振動,在反應尚未完成時不應取出試管,因為尚未完全形成的凝膠被破壞后不能被還原,容易出現假陰性。

  3 結果判斷

  鱟試驗法由于是以細菌內毒素激活其中凝集因子和凝聚酶,在試管中形成凝膠的一系列生化反應替代不了哺乳動物自身熱反應的整個生理過程,因此,在中國藥典2000版中檢測方法由單一的凝膠法增加了定量檢測法,所以當用鱟試驗法測得結果為陰性時,可不再用家兔法作熱原試驗,組結果可疑時,須按規定重做一遍或用家兔法來復檢。

  作者單位:235000安徽金蟾藥業集團有限公司

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